1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
意义：
猪链球菌共有三十五个血清型,其中2型被认为是最常见的致病型。猪链球菌2型(Streptococcus suis2，SS2)是一种重要的人畜共患病病原。迄今为止，SS2已在包括欧美、澳大利亚和中国在内的20多个国家和地区引发了人感染。人与生猪及猪肉产品接触后可感染发病,导致脑膜炎、失聪、心内膜炎及败血性休克等。尤其值得关注的是，我国的江苏和四川两省分别在1998年和2005年发生过两起猪链球菌感染猪和人的公共卫生事件，感染者出现了国内外罕见的链球菌中毒性休克综合征(Streptococcal toxic shock syndrome，STSS),事件分别导致14人及38人死亡。
SS2存在着强致病力、弱致病力和无致病力菌株。强致病株能引起猪严重的临床症状，并能从中枢神经系统分离出病菌。弱致病力菌株仅引起温和的临床症状，偶尔能从中枢神经系统分离出该菌。无致病菌力株不引起临床症状。其致病力的差异与各菌株的毒力因子密切相关。猪链球菌的毒力因子较为复杂，已知的猪链球菌的疑似毒力因子有溶菌酶释放蛋白(MRP)、细胞外蛋白因子(EPF)、溶血素(SLY)、荚膜多糖(CPS)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(FPBS)、毒力相关序列ORF2、谷氨酸脱氢酶(GDH)等，但目前只有CPS 是确定的毒力因子。
2. 研究的基本内容和问题
目标：表达并纯化猪链球菌kAr蛋白，鉴定其免疫原性。
内容：①分析kAr基因序列，选定拟表达片段。
②对kAr蛋白进行克隆表达并纯化
3. 研究的方法与方案
研究方法：蛋白表达纯化、western-blot分析
根据猪链球菌2型kAr的基因序列，分析选择免疫原性较高部分的基因序列设计和合成引物，并以该菌株基因组DNA为模板，通过PCR技术，扩增出蛋白的部分基因并定向克隆至表达载体中。重组质粒通过PCR鉴定和测序后，转化入大肠杆菌进行原核表达，最后利用Western-blot证明该重组蛋白具有被抗体识别的抗原表位。
技术路线：选定拟表达序列设计引物表达蛋白纯化蛋白测定蛋白浓度western-blot鉴定免疫原性
4. 研究创新点
①猪链球菌的毒力因子尚不清楚，到目前为止确定的毒力因子只有CPS。本研究通过对2型强弱毒株比较蛋白组发现的强毒株特有的蛋白kAr的原核表达及免疫原性分析，为猪链球菌毒力因子的研究打下基础。
②通过western-blot对表达纯化出的猪链球菌kAr蛋白进行免疫原性分析，为以后研究其对毒力的作用及致病机理的研究奠定基础。
5. 研究计划与进展
研究计划：①半个月：查阅相关文献，自行设计引物并合成。
②半个月：表达猪链球菌kAr蛋白。
③半个月：纯化猪链球菌kAr蛋白。
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