乙型脑炎NS1蛋白抗原表位的鉴定开题报告

 2023-02-12 12:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

流行性乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）简称乙脑，是由黄病毒科黄病毒属的乙型脑炎病毒（Japaneseencephalitis virus，JEV）引起，主要侵害中枢神经系统的一种人畜共患自然疫源性急性传染病。人感染后死亡率高，常留有神经-精神后遗症。流行性乙型脑炎由蚊虫传播，对猪可引起繁殖障碍，造成养猪业的巨大经济损失，同时，猪也是JEV的中间宿主，带毒猪是本病的主要传染源。我国农业部1999年将猪流行性乙型脑炎归为二类动物疫病。

1871年，JE在临床上有了最初的认识，1924年，流行性乙型脑炎病毒在日本东京医院1名死于脑炎的19岁男子的脑组织中首次分离得到。在此次流行中有约600人发病，病死率高达60%。1935年在日本人群众流行本病时，用小鼠由病马脑组织中分离到病毒，进而证明这种病毒的性状与从人脑中分离的病毒完全一致。随后又在猪、牛、山羊等多种动物体内分离到同样的病毒，故称日本脑炎病毒。同年，中国第一次爆发JE，并于1940年正式分离得到病毒。1949年定名为流行性乙型脑炎（简称乙脑）。

乙脑是病毒性脑炎中病死率最高的，全世界每年大约有50000例乙脑发病，其中15000例死亡。该病主要分布在东南亚和太平洋西部地区，并有逐步扩大的趋势，一些原来为非乙脑流行的国家地区也发现了乙脑流行。据报道，该病每隔十年就会发生一次大规模流行。我国是乙脑发病人数最多的国家，主要分布在除新疆、青海、西藏和东北北部外的所有省和自治区。我国的乙脑病例每年有2万多例，病死率10%以上，幸存者有15.3%留有不同程度的后遗症。

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2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标

1、乙型脑炎病毒NS1-6P-1表达载体的构建

2、六株乙型脑炎病毒蛋白NS1单抗的抗原表位鉴定。

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3. 研究的方法与方案

一、研究方法

通过对乙脑病毒NS1基因的分段表达，获得不同位置的蛋白片段，通过western blot，利用单克隆抗体与蛋白片段的特异性反应，鉴定得到单抗表位。

二、技术路线

载体质粒NS1-6p-1的制备

目的片段的准备

原核表达载体的最终构建及鉴定

Western blot方法鉴定单抗表位

六株单抗与NS1和病毒的western blot

NS1病毒蛋白单克隆抗体与分段表达的NS1蛋白的western blot


三、可行性分析

现今乙脑病毒NS1蛋白的分析研究已有较多研究成果的论文，原核表达载体的构建技术、western blot技术较为纯熟。对于乙脑病毒NS1蛋白，传染病实验室具有六株单抗并已通过ELIZA方法得到单抗效价。我们将在此基础上，具体研究乙脑病毒NS1蛋白单克隆抗体的表位鉴定，传染病实验室对上述研究内容的技术和方法已基本掌握。

4. 研究创新点

5. 研究计划与进展

2014.22014.3充分掌握并构建原核表达载体。

2014.32014.4 western blot方法鉴定六株单克隆抗体表位。

2014.42014.5根据实验结果，得到结论并结题。

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