1. 研究目的与意义
葡萄球菌肠毒素(Staphyloccucal enterotoxins,SEs)是由葡萄球菌分泌的细菌外毒素,目前已报道的有 SEA、SEB、SEC1-3、SED、SEE、SEF、SEG 等二十多种血清型,共称为葡萄球菌 SE 类超抗原,是细菌性食物中毒、化脓性感染、院内感染的重要毒素。
由金黄色葡萄球菌肠毒素 B(SEB)引起的 TSS 的病死率可达 50%,与流感并发的 SEB感染的死亡率更高达 90%以上,因此 SEB 被美国特殊作战处列为常规储存的"标准"("经典")生物战剂。
单克隆抗体逐渐从单纯的科研工具转变为强大的生物药用于多种疾病治疗。
2. 文献综述
构建 DVD 抗体的过程中有两个非常关键的步骤,一是连接两个可变区之间的linker,二是两个亲源抗体可变区在 DVD 分子中的前后顺序。
Linker 序列一般均选择人类免疫球蛋白轻重链恒定区 N 端起始的几个氨基酸,因为这一区域的氨基酸的柔韧性比较好,不会影响 DVD 抗体的正确折叠。
Chengbing[43]等分别用轻链 TVAAP 5个氨基酸和重链 ASTKGP 6 个氨基酸成功构建了 DVD 1D4.1-325,而我们在承担 973项目抗体-抗体分子识别的结构基础和功能研究总结出 9 个氨基酸的轻链TVAAPSVFI 和重链 ASTKGPSVF 为最适合 Linker,因此本部分研究中,我们采用 9个氨基酸的 Linker 成功构建了 DVD3E2-4A3 和 4A3-3E2。
5. 难点与创新点
本研究在自行制备腹水型葡萄球菌肠毒素mAb 的基础上, 采用Protein A 亲和层析法纯化抗体。
以天然表达CD86 分子的人B 系淋巴瘤细胞Raji、Daudi 和多发性骨髓瘤细胞 8266 为观察对象,将其与不同浓度的鼠抗人CD86 mAb 共同孵育,分析抗体对肿瘤细胞增殖、迁移及凋亡的影响。
应用 GraphPad Prism 7. 0 统计软件,对实验结果采用 t 检验进行统计学分析,所得实验数据用 x s 表示。
