稻瘟病菌Auxilin-like蛋白MoSwa2的互作蛋白鉴定开题报告

 2023-02-19 08:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

水稻属于草本稻属中的一种,属于谷类,同时它也是稻属中作为粮食的最主要最悠久的一种。水稻原产于中国和印度,在大约七千年前中国长江流域就有种植水稻。水稻不仅仅是我国重要的粮食作物,而且世界上近一半人口,也都是以大米为食。水稻除了可以作为食用之外,还可以作为酿酒、制糖工艺中的工业原料,稻壳、稻秆也可以作为饲料。我国的水稻主产区主要是长江流域、东北地区和珠江流域。水稻三大主要病害是:稻瘟病、白叶枯病、纹枯病。

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2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标

针对稻瘟病菌中的Auxilin-like蛋白MoSwa2的互作蛋白进行鉴定以及表型分析。

二、研究内容

在实验室前期的研究中,发现MoSwa2蛋白是一种调控囊泡转运以及胞吞过程的辅助因子蛋白。并发现其对于病菌的致病力有一定的影响。为了进一步研究该蛋白对致病力的影响,所以就设计实验通过免疫共沉淀技术(CoIP)找到它的互作蛋白,并对众多互作蛋白进行了一对一验证,并对目标蛋白进行对应的基因敲除获得目标蛋白突变体,继而进一步进行表型分析。

三、拟解决的关键问题

(1)找到MoSwa2蛋白的互作蛋白(2)对互作蛋白进行一对一验证,找出目标蛋白(3)对目标蛋白进行基因敲除

3. 研究的方法与方案

一、研究方法

(1)采用CoIP技术筛选与相互结合的蛋白:以抗体和抗原在之间的专一性为基础,研究两种蛋白在活体细胞中的生理性相互作用。分别转化稻瘟病菌 Guy11菌株后筛选获得转化子;提取转化子总蛋白,接着进行亲和层析,获得与MoSwa2相互作用的蛋白,并通过质谱分析蛋白种类。进一步在稻瘟病菌全序列数据库中鉴定到相对应的编码基因。

(2)通过同源重组技术获得上述基因敲除突变体:运用同源重组的原理敲除一个功能未知的基因就是从分子水平上设计实验,将该基因去除,或用其它顺序相近基因取代,然后从整体观察实验对象,并推测其的相应基因的功能。

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4. 研究创新点

  1. 实验方案设计新。采用免疫共沉淀技术筛选MoSwa2蛋白的结合蛋白;利用质谱分析结合蛋白序列,从全基因组数据库中鉴定其对应的编码基因。

  2. 立意新。从全基因组范围鉴定致病因子MoSwa2蛋白的结合蛋白,并对其生物学功能进行分析。研究结果对解释稻瘟病菌与致病相关的分子机制具有重要帮助,对寻找控制稻瘟病菌的方法有着重要的意义。

5. 研究计划与进展

一、研究计划

2018年9月-2018年10月 进行实验前期准备工作

2018年10月-2018年11月 查阅实验的相关材料,进行实验设计,选择合适的实验方法

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