CRISPR/Cas12a介导的核酸检测策略及其在食源性大肠杆菌检测当中的应用开题报告

 2023-04-03 09:48:39

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

文 献 综 述食源性大肠杆菌概述大肠杆菌(E. coli)最早由 Escherich 发现于1885年,作为条件致病菌的代表而广为人知,革兰氏染色反应呈红色显阴性,有着两端钝圆呈短杆状的形态特点,周生鞭毛且数量较少(5条以下)[1]。

致病性大肠杆菌按照生物学特性的差异可分为以下6类 :肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、弥散黏附性大肠杆菌(DAEC)、 肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)和肠黏附性大肠杆菌(EAEC)[2]。

作为兼性厌氧菌,大肠杆菌在有氧和无氧环境中均可生存,对环境有着较强的适应能力。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

一、需解决的问题:1、Cas12a蛋白在大肠杆菌DH5α中高效表达的最适条件的确定;2、如何提高Cas12a的表达量;3、优化CRISPR/ Cas12a的检测系统反应条件; 4、优化CRISPR/ Cas12a的检测灵敏度。

二、拟采用的研究手段:1、通过化学转化法,将pMBP-LbCas12a转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,使其在特定原核生物或细胞内表达。

2、设置温度梯度,改变诱导表达的条件,确定最适诱导温度。

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