结肠癌细胞胞内代谢物提取方法的优化研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

在蛋白组学和转录组学技术成熟的今天，致力于机体代谢物高通量测量的代谢组学发展相对落后。

而基于代谢物水平是所有调控的最终产物的事实，与蛋白组学和转录组学相比，代谢组学能更好地代表细胞表现型[1]。

因此，突破代谢组学发展中出现的技术壁垒，优化现有实验条件是十分必要的。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：利用SW480结肠癌细胞株，通过改变、调控各种影响因素以优化结肠癌细胞胞内代谢物提取方法，提高胞内代谢物提取的质量与数量，为结肠癌细胞胞内代谢物的后续研究提供理论基础和技术支持。

研究内容和拟解决的关键问题：研究内容主要为SW480结肠癌细胞胞内代谢物提取方法的优化。

胞内代谢物的收集需要经历胞内酶淬灭和细胞裂解抽提这两个步骤，这是我们方法学研究的重点。

3. 研究的方法与方案

研究方法：SW480结肠癌细胞细胞培养后，根据设定的淬灭过程影响因素和抽提过程影响因素而得出的正交设计表，对每个样品进行提取，之后经过衍生化处理和色谱质谱分析，获得实验数据并进行分析，确定最佳提取条件。

技术路线：见附件1实验方案：① 设定淬灭过程有如下影响因素：1. 温度：取值-80℃、-40℃和-4℃ 2. 甲醇浓度：取值50%、60%、70%、80%、90%、100%3. 碳酸氢铵溶液浓度：0.425%、0.85%、1.7% 4.ppH值:6.6、7.0、7.4② 设定抽提过程有如下影响元素：1. 抽提液成分：溶液1为50%水相乙腈、溶液2为乙腈:甲醇:水为40:40:20的混合液2. 是否加保护液（抽提时加入0.1M甲酸，抽提后加入NH4HCO3中和）：加、不加③ 利用SPSS软件得出正交设计表为：见附件2④ 胞内代谢物提取与分析上述不同提取方法得到的样本经过衍生化处理和仪器分析后得到的代谢总离子流图谱，再经过数据转换、提取。

参考代谢物图谱中峰的数量、有效峰强度、峰之间的分离程度，确定最佳提取方法。

4. 研究创新点

本研究在前人研究的基础之上，再进一步予以优化，以提取更高浓度、更具代表性的结肠癌胞内代谢物，为寻找结肠癌生物靶点等的基础研究提供理论和技术支持。

5. 研究计划与进展

3月至3月中旬：文献阅读及预实验3月中旬至5月上旬：SW480结肠癌细胞的培养，各条件下的胞内酶淬灭与抽提以及气相色谱质谱分析5月上旬至6月：分析整理实验数据，寻找SW480结肠癌细胞胞内代谢物的最优提取方法，并撰写毕业论文。

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