1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1 意义：由于犬体内没有抵抗这种流感病毒的抗体，而且宠物犬和人类的密切接触不能排除病毒变异将会传染给人的可能性，所以研究犬流感病毒具有重要的公共卫生学意义。
2 国内外研究概况：目前研究表明，犬在自然和试验条件下对一些亚型的流感病毒易感。2004年美国加州赛犬业暴发了马源H3N8型流感病毒的感染；2007年韩国出现了禽源H3N2型犬流感病毒；且马源和禽源犬流感病毒均可在犬之间通过接触传播，这引起了各国学者的广泛关注。近年来我国也不断有犬流感病毒感染发病的报道。我国于2006年-2007年从犬体内分离到禽源H3N2亚型CIV；2009年我国报道犬感染H1N1亚型流感病毒，基因序列分析表明该病毒与当时人群中流行的甲型H1N1流感病毒同源性高达99 。
3 应用前景：为有效预防犬流感的发生和传播提供参考。
2. 研究的基本内容和问题
1 研究的目标：分离获得CIV,并对其遗传演化关系进行分析。
2 研究的内容：为了解南京地区CIV 的流行情况，本研究对患有呼吸道症状的犬群进行病原学调查,分离获得CIV,并对其遗传演化关系进行分析,旨在为有效预防犬流感的发生和传播提供参考。
3 拟解决的关键问题：分离获得CIV。
3. 研究的方法与方案
1 研究方法和实验方案：
（1）设计引物序列 应用DNAStart及Primer Primer软件，对GenBank上登录的多个H3N2 亚型CIV的基因序列进行比较，并在相对保守区分别设计了扩增3个基因的引物。引物由上海Invitrogen公司合成。
（2）病毒分离 采集的拭子在管壁反复挤压后取出，充分振荡管中液体。置4℃待其自然沉淀5 min-10min，12000rmp离心3min,再用0.22 mm滤器过滤。经尿囊腔接种9日龄-11日龄SPF鸡胚，每个拭子接种3枚胚，0.2mL/枚，置37℃孵育，弃去24 h内死亡胚，每12 h观察一次，将死胚置于4℃冰箱保存。96h后置4℃冷却过夜，无菌收集鸡胚尿囊液。参照国标方法进行红细胞凝集(HA)试验，。有血凝活性者作进一步鉴定；无血凝活性者将其尿囊液盲传3代，仍无血凝活性者弃去。阳性者置-20℃。
4. 研究创新点
1 特色：进行系统进化分析和变异性分析。
5. 研究计划与进展
1 研究计划
3月 分离犬流感病毒；
4月 进行RNA提取、反转录、PCR、HA基因和NA基因的克隆与鉴定；
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