SUMO蛋白酶种子库的建立与检定开题报告

 2023-01-08 10:30:32

1. 研究目的与意义

SUMO 蛋白酶,又叫ULP蛋白酶。

是一种具有较高活性的半胱氨酸蛋白酶。

SUMO蛋白酶以 一种非常特异的方式切割蛋白,它特异性识别UBL蛋白的三级结构-SUMO,而不是氨基酸序列,故该蛋白酶可以切割重组融合 蛋白的SUMO。

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2. 文献综述

综述:SUMO及SUMO蛋白酶的认识及其应用摘 要 SUMO是泛素类蛋白家族的重要成员之一,尽管SUMO的生化反应途径与泛素相似,但不像泛素那样诱导底物蛋白降解,而SUMO蛋白酶对SUMO融合表达系统表达的重组蛋白切割时没有多余氨基酸残留,因此成为蛋白切割工具的热点。

通过对两者的了解与应用来掌握其本身的临床价值。

关键字SUMO;SUMO蛋白酶;肿瘤蛋白酶,又叫ULP蛋白酶。

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3. 设计方案和技术路线

1.种子库制备:以7#单菌落,扩培制备原始种子库,甘油浓度20%,每支装液量0.5ml,数量100支, -70~-20℃,保存。

2.种子库检定:1)LB琼脂平板划线;2)革兰氏染色镜检;3)抗生素抗性实验;4)菌种表达量;5)生化反应(乳糖发酵试验、靛基质试验、甲基红实验、乙酰甲基甲醇生成实验、枸橼酸盐利用试验);6)电镜检查;7)质粒检查;8)目的基因测序。

计8项,其中前5项自检,后3项需外包。

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4. 工作计划

01070201选择课题,查阅文献,了解实验内容02020218活化菌种,筛选出最佳菌落,备用02180307完成开题报告,明确课题的内容,意义03010429设计实验内容,并且完成实验,建立好原始、主和工作种子库的建立与鉴定05010510整理实验数据,统计分析,选择最佳工艺数据05110520完成论文初稿05210605定稿

5. 难点与创新点

SUMO蛋白酶具有的优势:识别位点长,特异性强;适应多种反应条件,可低温切除;带有His标签,便于纯化; 完整切除,得到天然蛋白等优势

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