苦参同源四倍体诱导与鉴定开题报告

 2023-02-11 12:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

苦参[Sophora flavescens Ait]为豆科苦参属多年生落叶半灌木植物,常被称为苦槐、苦骨、水槐(《本经》)、地槐、野槐(《纲目》)、虎麻和川参[1]。

苦参含多种生物碱、脂肪酸、挥发油、还含黄酮类化合物,具有抗乙肝病毒[2]、抗肿瘤、抗过敏、升白细胞、体内外抗菌、护肤美容、平喘祛痰、免疫抑制等作用[3-4],并且对实验性胃粘膜损伤有保护作用[5],据报道苦参碱对肝癌、胃癌、黑色素瘤、膀胱癌、乳腺癌等癌细胞有转移、增殖抑制、分化诱导等作用。

除药用外,苦参在其他方面用途也很广泛,如在农业上有除虫,防治牲畜病害的作用;在美容护肤上有预防皮肤疾病的作用;在新农药的研究前景上,是新农药的先导化合物[6],研发出的农药产品作用在农作物上较难产生抗药性,是有利于环境可持续发展的绿色农药,且具有较长且稳定的药效,还能增加农作物的产量。

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2. 研究的基本内容和问题

本研究以苦参二倍体为实验材料,利用组织培养技术和秋水仙素诱导方法,并采用敲根尖的方法对植株是否为四倍体进行鉴定,并得到苦参四倍体植株,为苦参多倍体育种打下基础,其实验目标有两个:其一建立苦参无菌快繁体系,确立其不同培养阶段所需的最适培养基与培养条件;其二用秋水仙素诱导苦参同源四倍体,筛选出最适变异浓度、诱导时间、诱导组织及诱导方式。

实验中可能存在的问题:(1)组培过程中的污染。

(2)秋水仙素毒性较大,死忙率高,很难获得大量的多倍体株系用于后续研究。

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3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法:1.苦参无菌快繁体系的建立 切取培养基苦参的幼嫩茎尖或芽尖转入不同激素浓度配比的增殖培养基上扩大繁殖。

2.苦参同源四倍体的诱导将大小一致的苦参芽尖分别置于质量浓度为0.05%、0.1%、0.2%的秋水仙素(加0.02 gml-1二甲亚砜)混合液中,秋水仙素混合液用高温灭菌法和抽滤灭菌法灭菌,每一质量浓度的处理时间分别为12h、24h、36h、48h,以未经秋水仙素处理的培养材料为对照。

处理完毕后用无菌水冲洗3次,接种到MS培养基中进行培养,每个处理做5次重复。

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4. 研究创新点

多倍体植株营养器官的巨大性对作物产量的提高、品质的改善、活性成分含量增加具有非常重要的影响,并且多倍体植株的抗逆性能促使植物更好地适应外部环境。

因此通过多倍体育种的方法选育苦参优良品种有重要的意义。

同时截止到目前,除了关于苦参的组培简单的报道和几篇苦参再生植株和生根研究外,未见到有关苦参四倍体新种质诱导的研究。

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5. 研究计划与进展

2015.5~2015.7:查阅文献,确定试验方案2015.7~2015.11:增加苦参快繁体系数量2015.9~2015.11:完成苦参每个生长阶段最佳培养基的筛选2015.11~2016.1:秋水仙素诱导2016.1~2016.3:待秋水仙素诱导的幼苗生根2016.3~2016.5:采用细胞学对苦参诱导材料进行鉴定通过试验,增加苦参快繁体系数量,并培育出苦参四倍体植株,通过压片法对染色体鉴定,为多倍体育种和生产实践提供理论依据。

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