苯噻菌酯竞争和非竞争荧光免疫分析方法的建立开题报告

 2023-02-17 09:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

一.研究意义目前苯噻菌酯的检测以仪器检测为主,有关苯噻菌酯残留检测方法主要是高效液相色谱法(HPLC)。

王鸣华等[1]运用高效液相色谱建立了苯噻菌酯的标准仪器检测方法。

尽管仪器方法有着检测灵敏度高等优点,但其同时存在样品前处理繁琐、需专业人员进行仪器操作、无法满足现场快速检测等不足,免疫检测技术具有简便、快速、低成本和可靠的特点[2-3],非常有利于提高我国农产品的抽检监测力度。

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标通过固相合成多肽技术实现多肽纳米化,改善其在噬菌体外壳蛋白上整体粒径较大,不易在免疫检测方法中广泛应用和长期保存,并且存在污染其它生物试剂的风险的缺点。

因此,对纳米多肽竞争和非竞争物的研制和应用具有重要的理论指导意义。

为此,本课题拟在已获得苯噻菌酯等农药噬菌体展示多肽竞争和非竞争物的工作基础上,根据苯噻菌酯荧光免疫分析出的小分子浓度大小拟合标准曲线,建立苯噻菌酯的定量检测方法。

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3. 研究的方法与方案

五.实验方法5.1 检测灵敏度的测定对纳米多肽或抗体用不同方式进行标记,并选择相应的免疫检测方法,通过建立标准曲线,计算IC50 (SC50),测定各纳米多肽竞争和非竞争物在免疫检测中的灵敏度。

对于竞争多肽,当体系中存在较高浓度的分析物时,小分子和多肽竞争结合抗体作用位点,经分离后得到较低的荧光强度;当体系中存在较高浓度的分析物时,抗体捕获分析物形成免疫复合体,此时非竞争多肽才能与复合体结合,再经分离后可检测到较强的荧光信号。

5.2其他材料的制备及纯化5.2.1抗体的制备通过实验室已经获得的苯噻菌酯细胞株制备小鼠腹水,获得抗体。

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4. 研究创新点

1. 对噬菌体展示多肽实现纳米化2. 检测过程中实现抗原抗体分离,放大检测信号3. 均相免疫分析,并且直接对纳米多肽进行荧光标记,实现一步检测,缩短检测时间

5. 研究计划与进展

2017.07-08查阅相关文献,做好理论准备2017.09仪器条件准备,初步摸索实验条件2017.10-12合成氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒,并对最佳反应条件进行优化。

2017.11-2018.1建立苯噻菌酯的磁分离荧光免疫分析方法2018.1-3完成实验中期检查报告2018.3-6整理实验数据,撰写毕业论文预期实验结果:1. 验证标记多肽的活性2. 获得苯噻菌酯的定量检测标线

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