罗伯茨绿僵菌与大胞绿僵菌对小麦促生作用比较开题报告

 2024-01-02 10:01

1. 研究目的与意义

背景：

绿僵菌隶属于真菌门子囊菌亚门核菌纲球壳菌目麦角菌科 。是我国及全世界应用较广泛且研究较多的一类昆虫病原真菌，大多数绿僵菌还是腐生菌、根际真菌及有益根系内生菌，并具备在不同生命周期转换的能力，除能寄生杀死靶标昆虫外，部分绿僵菌菌株能够在植物根部定殖并促进宿主植物生长。

目的：

以小麦幼苗为实验对象,比较罗伯茨绿僵菌和大胞绿僵菌对小麦的促生作用异同。一定浓度的罗伯茨绿僵菌和大胞绿僵菌的孢子液浸种，水培方法培养实验材料，通过对实验材料的萌发指标（发芽率，发芽指数等），叶绿素含量、MDA（丙二醛）含量、POD（过氧化物酶）活性、CAT（过氧化氢酶）活性、NR（硝酸还原酶）活性、氧自由基产生速率、质膜透性等指标的动态测定，探明罗伯茨绿僵菌与大胞绿僵菌促进宿主植物——小麦生长能力的差异。

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2. 研究内容和预期目标

预期目标：

1.明确绿僵菌对小麦种子萌发无影响，对小麦幼根生长有促进作用。

2.通过测定指标得到大胞绿僵菌对小麦的影响

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3. 研究的方法与步骤

指标测定方法与步骤：

硝酸还原酶(NR)活性测定（活体法）：

  1. 新鲜取回的小麦叶片水洗,用吸水纸吸干,然后用钻孔器钻成直径约1cm的圆片,用蒸馏水洗涤2-3次,吸干水分，然后于天平上称取等重的叶子圆片两份，每份0.3-0.4g(或每份取50个圆片),分别置于含有下列溶液的50mL三角烧瓶中:①0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液5mL 蒸馏水5mL;②0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液5mL 0.2mol/L KNO35mL。然后将三角烧瓶置于真空干燥器中,接上真空泵抽气，放气后圆片即沉于溶液中(如果没有真空泵，也可以用20mL注射器代替，将反应液及叶圆片一起倒人注射器内，用手指堵住注射器出口,然后用力拉注射器使之真空,如此抽放气反复多次，即可使叶圆片中空气抽去而沉人溶液中)。将三角烧瓶置于30℃温箱中,避光保温作用30min,然后分别吸取反应液1mL,以测定NO2-含量。
    注意取样前叶子要进行一段时间的光合作用，以积累糖类，如果组织中糖类含量低，会使酶活力降低，此时则可在反应溶液中加人30μg 3-磷酸甘油醛或1,6-二磷酸果糖,能显著增加NO2-的产生。
    2.NO2-含量的测定 保温30min结束后,吸取反应液1mL于一试管中，加人磺胺试剂2mL,混合摇匀后再加入α-萘胺试剂2mL,再次混合摇匀,静置30min,用分光光度计(520nm)进行测定，记下吸光值，从标准曲线上读出NO2-含量，再计算酶活力，以每小时每克鲜重产生的NO2-(μg或μmol)表示。
    3.标准曲线的制作测定 NO2-的磺胺比色法很灵敏，可检出低于1μg/mL的NaNO2含量,可于0-5μg/mL浓度范围内绘制标准曲线。由于显色反应的速度与重氮反应及偶联作用有关,温度、pH都影响显色速度，同时也影响灵敏度，但如果标准与样品的测定都在相同条件下进行，则显色速度相同,彼此可以比较。
    吸取不同浓度NaNO3的溶液(0.5、1、2、3、4、5μg/mL)1mL于试管中,加入磺胺试剂2mL及α-萘胺试剂2mL,混合摇匀，静置30min(或于一定温度水浴保温30min),立即于分光光度计(520nm)比色。以吸光值为纵坐标,NaNO2浓度为横坐标绘制吸光值-浓度曲线。

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    4. 参考文献

    [1]廖兴刚,胡明瑜,孟泽彬,等.不同绿僵菌菌株在玉米根际的定殖及对玉米生长的影响[J].西南农业学报,2021,34(08):1657-1662.

    [2]刘少芳. 金龟子绿僵菌内生性及对花生生长促进作用[D].中国农业科学院,2015.

    [3]刘婷, 夏鹏亮, 解晓菲, 等. 绿僵菌对植物的促生防虫作用研究进展 [J]. 湖北植保，2022，(5): 22-26.

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    5. 计划与进度安排

    （1）2022-2023-1学期17-19周及2022-2023-2学期第1周-第3周（2022年12月19日～ 2023年3月10日），查阅资料和文献，完成开题报告，外文论文翻译；

    （2）第4周-第6周（2023年3月13日～3月31日），浸种，学习培养实验材料，摸索实验方法；

    （3）第7周-第11周（2023年4月3日～ 2023年5月5日），培养小麦幼苗，熟悉实验方法，确定处理的浓度及方法，测定生理指标；

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