1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.1研究意义及应用前景
乳腺炎是奶牛养殖行业中造成经济损失最大的疾病之一。牛乳腺炎是反应乳腺损伤的一种炎症，是机体的一种自我保护机制[1]。其中大肠杆菌是奶牛感染临床型乳腺炎的主要病原菌，乳腺中大肠杆菌数量增加越快，乳腺中存在的LPS越多，就可能更快导致临床型炎症的发生。LPS是革兰氏阴性菌细胞壁上一种成份[2]，广泛存在于自然界致病原，在细菌死亡或快速繁殖的时候可以大量释放。研究表明，LPS 是一种高效的促炎反应因子[3]，能够促进动物机体产生急性期反应蛋白和大量的细胞因子，引起机体炎症反应，致使乳腺泌乳营养代谢模式、内分泌调控模式等随之改变，对乳脂肪、乳蛋白及乳糖的合成和含量有较大的影响[4-5]。另外大肠杆菌引起的炎症感染十分典型，能引起快速和剧烈的免疫应答反应。乳腺内感染大肠杆菌可引起全身变化，包括诱导急性期蛋白LBP合成、引起发热反应等。感染导致牛奶中水平增加的因子有：如胰岛素样生长因子1、IL-1β、IFN-γ、IL-12、IL-8、TNF-α、 sCD14、LBP、补体裂解因子C5a、乳铁蛋白，溶菌酶和脂质介质等[6]。
从乳腺结构来看，乳腺上皮细胞是乳腺防御病原菌入侵的第一线[7]，在免疫应答、局部抵御、合成及分泌乳汁中发挥重要作用[8-10]。目前研究者在实验室多采用乳腺上皮细胞作为研究乳房的模拟试验模型[11,12]。本试验选择健康中国荷斯坦牛，无菌采集乳腺组织，采用组织块接种法在DMEM培养液培养牛乳腺上皮细胞。采用不同浓度的LPS处理乳腺上皮细胞，探究脂多糖（LPS）对奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的影响，为乳房炎的相关研究提供依据。
2. 研究的基本内容和问题
2.1研究目标：
1)培养较高纯度奶牛乳腺上皮细胞；
2)LPS对奶牛乳腺上皮细胞细胞活力的影响的探究；
3. 研究的方法与方案
3.1拟采取的研究方法
1)奶牛乳腺上皮细胞的纯化、培养及鉴定：外科手术法釆取乳腺组织，进行原代培养，经3至4次纯化后，可得到纯度较高(大于95%)的奶牛乳腺上皮细胞。上皮细胞经免疫组化鉴定后，可以用于后续试验。
2)乳腺上皮细胞存活率检测：通过MTT法，在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光值，计算相对细胞存活率
4. 研究创新点
通过建立乳腺上皮细胞炎症模型，实现对由革兰氏阴性菌引发的乳房炎发病机制研究的模型化和标准化。
5. 研究计划与进展
1)2015年11月-2016年1月：乳腺上皮细胞培养以及实验室指标测定阶段。在学校实验中心综合检测与分析，主要为乳腺上皮细胞存活率及细胞培养液IL-β、TNF-α浓度的测定；
2)2016年2月-2016年5月：整理数据，撰写论文。
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