1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1.1研究意义 紫花苜蓿(Medicago sativa L.)是全球栽培面积最大的豆科牧草[1], 有牧草之王的称号。
紫花苜蓿是豆科苜蓿属多年生草本植物,喜中性或偏碱性土壤。
紫花苜蓿产草量高,含有丰富的营养物质,便于适时收获利用,适口性好,营养价值高,不仅是食草家畜的主要优质饲草,也是猪、禽、鱼配合饲料中重要的蛋白质、维生素补充饲料。
2. 研究的基本内容和问题
2.1研究的目标采用转基因技术,获得过量表达MATE66的转基因紫花苜蓿。
2.2研究内容本研究以品质优良、营养价值高的多年生豆科牧草紫花苜蓿为研究对象,利用农杆菌介导的遗传转化法,使MATE66基因在紫花苜蓿中过表达。
主要内容有:1过表达MATE66的转基因紫花苜蓿植株的获得2转基因植株的鉴定 2.3拟解决的关键问题建立高效的紫花苜蓿农杆菌介导目的基因的遗传转化体系
3. 研究的方法与方案
2.4研究方法 (1)转基因紫花苜蓿植株的获得①过量表达构建选用已证明能提高植物耐铝性的MATE66基因,以35s启动子驱动MATE66基因的表达,以pCAMBIA3301为基础载体,构建过量表达载体。
②转基因紫花苜蓿的获得采用本实验室已经建立的农杆菌介导法,用含有过量表达载体的农杆菌菌株EHA105浸染紫花苜蓿愈伤组织,暗培养2~3天后,然后转到含Basta的筛选培养基上培养6周,筛选出存活的愈伤组织。
进一步转到再生培养基上,照光培养6~8周;将绿色小苗移到生根培养基上生根,最后移栽到培养盆内。
4. 研究创新点
过去对紫花苜蓿的铝毒的防治以传统方法较多,而这些办法难以彻底解决土壤酸性问题,只能从表面上对土壤进行改良,本研究将耐铝基因导入紫花苜蓿,获得提高耐铝性的转基因植物,从而缓解紫花苜蓿的铝胁迫。
5. 研究计划与进展
前期 开展转基因紫花苜蓿的实验工作,获得再生苗。
中期 获得转基因植株,完成分子检测。
后期 完成转基因植物的耐铝性分析。
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