改良海滨雀稗抗寒性的基因工程研究开题报告

 2023-02-16 09:02

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.1 研究意义海滨雀稗(Paspalums vaginatium Swartz)是重要的暖季型草坪草,特别耐盐,也有较强的耐旱、耐涝、耐贫瘠、耐荫性和耐践踏性。

海滨雀稗有许多优良的草坪性状,叶片柔软, 紧贴地面, 草坪推杆性能好, 茎秆较细, 坚韧,叶色深, 草低矮, 需肥少, 剪草少,已在世界热带和亚热带地区广为种植,可用于高尔夫球场、足球场、机场和景观绿地等的草坪建植。

在美国佛罗里达、夏威夷、泰国、菲律宾等地区的高尔夫球场上使用表现极佳;引种到我国后,在南方地区的高尔夫球场被广泛应用,为业内人士及高尔夫爱好者所青睐;也是热带、亚热带沿海滩涂和类似的盐碱地区高尔夫等绿地建植的最佳选择。

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2. 研究的基本内容和问题

2.1 研究目标采用转基因技术,获得过量表达抗寒基因的转基因海滨雀稗,提高抗寒性。

2.2 研究内容(1)转基因海滨雀稗植株的获得采用农杆菌介导的遗传转化方法,将抗寒基因的表达载体导入海滨雀稗胚性愈伤组织,经过潮霉素或Basta筛选,获过转基因再生植株。

(2)转基因海滨雀稗的分子检测利用PCR技术对转基因再生植株进步初步检测,进一步利用Southern杂交技术检测PCR阳性植株中外源基因是否插入到转基因植物的染色体及插入拷贝数;利用定量RT-PCR检测外源基因是否在转基因植物中获得了表达。

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3. 研究的方法与方案

3.1 研究方法和实验方案(1)转基因海滨雀稗植株的获得①转基因海滨雀稗的获得采用本实验室已经建立的农杆菌介导法,用含有过量表达载体的农杆菌菌株EHA105浸染海滨雀稗胚性愈伤组织,共培养2~3天后,移到恢复培养基上培养1周,然后转到含Basta的筛选培养基上培养4~8周,筛选出存活的愈伤组织。

进一步转到再生培养基上,照光培养5~8周;将绿色小苗移到生根培养基上生根,最后移栽到培养盆内。

(2)转基因海滨雀稗的分子检测采用CTAB法提取DNA;根据目的基因序列,设计合适引物;对转基因再生植株进行PCR扩增,以野生型为对照。

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4. 研究创新点

4.1 特色或创新之处过去对海滨雀稗的耐盐性研究较多,而对抗寒性研究较少,还没有基因工程的研究,本研究将抗寒基因导入海滨雀稗,获得提高抗寒性的转基因植物,这是本项目的创新之处。

5. 研究计划与进展

5.1 研究计划及预期进展2017.6--2017.9 开展转基因海滨雀稗的实验工作,获得再生苗。

2017.9--2017.12 获得转基因植株,完成分子检测。

2017.122017.5 完成转基因植物的抗寒性分析。

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